Resumo O objetivo deste estudo foi verificar a presença e a identificação espécies de parasitas hemosporídeos em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil. Duzentos e onze pombos machos e fêmeas foram capturados em quatro regiões diferentes de Londrina, sul do Brasil. Amostra de sangue foi coletada em tubos contendo EDTA por meio de punção cardíaca, após eutanásia em câmara de CO2. Uma nested PCR com alvo no gene mitocondrial citocromo b (cyt b) de Haemoproteus spp./Plasmodium spp. foi realizada, seguida de digestão enzimática para identificar o gênero. A árvore filogenética foi construída para determinar a relação com outras espécies. Das 211 pombas, 209 (99,05%) foram positivas para Haemoproteus spp./Plasmodium spp. A análise RFLP demonstrou que 72,72% (152/209) das pombas foram positivas somente para Haemoproteus spp.; 6,22% (13/209) foram positivas somente para Plasmodium e 21,05% (44/209) das pombas tiveram infecções mistas. A análise genética mostrou quatro amostras homólogas com H. multipigmentatus e uma com Plasmodium spp. Este é o primeiro estudo molecular de hemoparasitas em pombos no Brasil. E é também a primeira descrição da infecção por H. multipigmentatus e Plasmodium spp. em pombos Z. auriculata no Brasil.

Abstract The aim of this study was to verify the presence and identify the species of haemosporidian parasites in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil. Two hundred and eleven male and female eared doves were trap-captured in four different regions of Londrina city, in southern Brazil. Whole blood was collected in EDTA tubes through heart puncture after euthanasia in a CO2 chamber. A nested PCR targeting the mitochondrial cytochrome b gene (cyt b) of Haemoproteus spp./Plasmodium spp. was performed, followed by an enzymatic digestion to identify the genus. Phylogenetic trees were constructed to determine the closely related species. Out of 211 eared doves, 209 (99.05%) were positive for Haemoproteus spp. and/or Plasmodium spp. RFLP analysis showed that 72.72% (152/209) of eared doves were positive only for Haemoproteus spp., 6.22% (13/209) were positive only for Plasmodium spp., and 21.05% (44/209) of eared doves had mixed infections. Genetic analysis found four samples that were homologous with Haemoproteus multipigmentatus and one that was homologous with Plasmodium sp. This is the first molecular study of hemoparasites from eared doves in Brazil, and it is also the first description of H. multipigmentatus and Plasmodium spp. infection in eared doves in Brazil.

Resumo Cryptosporidium é um protozoário com uma grande variedade de hospedeiros, incluindo os seres humanos. No entanto, poucas espécies têm sido descritas em aves (Cryptosporidium meleagridis, C. baileyi, C. galli e C. avium). O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em fezes de pombas-de-bando (Zenaida auriculata), e realizar a caracterização molecular dos isolados. Um total de 196 animais de ambos os sexos foram capturados, eutanasiados e o conteúdo intestinal recolhido para extração de DNA. Após a extração, realizou-se uma nested-PCR (nPCR), que amplifica um fragmento do gene 18S rRNA do Cryptosporidium spp.. Os fragmentos obtidos foram purificados e encaminhados para sequenciamento. Os resultados da n-PCR revelaram 30 animais (15.3%) positivos para Cryptosporidium spp.. Quanto ao sexo dos animais não foram observadas diferenças estatísticas significativas (p > 0.05). Somente 15 de 30 amostras positivas foram sequenciadas com sucesso e as espécies determinadas, das quais, 13 (86.7%) e 2 (13.3%) foram C. meleagridis e C. galli, respectivamente. Esse é o primeiro estudo com caracterização molecular de Cryptosporidium de fezes de pombas-de-bando (Z. auriculata), e propõe serem esses animais potenciais fonte de infecção de C. meleagridis para humanos.

Abstract Cryptosporidium is a protozoan parasite with a wide range of hosts, including humans. However, only a few Cryptosporidium species have been described in birds (C. meleagridis, C. baileyi, C. galli and C. avium). The aim of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. in feces of eared doves (Zenaida auriculata), followed by molecular characterization of the parasite. A total of 196 animals of both sexes were trap-captured; the animals were culled and the intestinal contents were collected for DNA extraction. After extraction, a nested-PCR (nPCR), which amplifies a fragment of the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp., was performed. The amplicons obtained were purified and sequenced. PCR analysis revealed that 30 animals (15.3%) were positive for Cryptosporidium spp. There was no significant sex-dependent enrichment of Cryptosporidium occurrence (p > 0.05). Only 15 out of the 30 positive samples were successfully sequenced and their species determined, of which, 13 (86.7%) and 2 (13.3%) were C. meleagridis and C. galli, respectively. Herein, we present for the first time a molecular characterization of Cryptosporidium from feces of eared doves (Z. auriculata) and propose that these birds are a potential source of C. meleagridis infection in humans.

Resumo A coccidiose bovina é uma doença de grande importância em rebanhos ao redor do mundo. A desordem afeta principalmente bezerros jovens, e E. bovis e E. zuernii consideradas as espécies mais patogênicas deste gênero, causando grave enterite em animais infectados. No entanto, casos de E. alabamensis foram descritos em bezerros mantidos a pasto. No presente estudo, a prevalência de Eimeria spp. foi avaliada em bezerros de gado leiteiro da região norte do estado do Paraná, Brasil. Quatrocentos bezerros foram amostrados e testados para a presença de oocistos de coccídios. Os positivos foram re-examinados e os oocistos analisados morfologicamente para identificação da espécie. Todas as fazendas estavam contaminadas e 205 (51,25%) animais apresentaram oocistos de Eimeria spp. Destes, 146 (71,22%) animais estava co-infectados por duas ou mais espécies de coccídio. Dez espécies de Eimeria foram identificadas: E. bovis (30,25% de amostras positivas), E. alabamensis (26,75%), E. zuernii (22,00%), E. ellipsoidalis (18,50%), E. auburnensis (13,75%), E. canadensis (8,10%), E. cylindrica (8,00%), E. subspherica (5,00%), E. bukidnonensis (3,00%) e E. brasiliensis (0,75%). Este estudo demonstra a alta prevalência de Eimeria spp. na região norte do estado do Paraná, Brasil, e a detecção, pela primeira vez, de E. alabamensis.

Abstract Bovine coccidiosis is a disease of major importance in cattle herds across the world. The disorder mainly affects young calves, and E. bovis and E. zuernii are considered the most pathogenic species of the genus, however, E. alabamensis have been described in grazing calves. In this study, the prevalence of Eimeria spp. was evaluated in calves on dairy farms in the northern region of the state of Paraná, Brazil. Four hundred calves on 44 dairy farms were tested for the presence of coccidian oocysts. The positives were re-examined and the oocysts were morphometrically analyzed for species identification. All the farms were contaminated and 205 animals (51.25%) presented Eimeria spp. oocysts. Among these, 146 animals (71.22%) were co-infected by two or more species of coccidia. Ten species of Eimeria were identified: E. bovis (in 30.25% of the positive samples), E. alabamensis (26.75%), E. zuernii (22.00%), E. ellipsoidalis (18.50%), E. auburnensis (13.75%), E. canadensis (8.00%), E. cylindrica (7.25%), E. subspherica (5.00%), E. bukidnonensis (3.00%) and E. brasiliensis (0.75%). This study demonstrates the high prevalence of Eimeria spp. in the northern region of Paraná, Brazil, and detection for the first time in our region the pathogenic species E. alabamensis.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de N. caninum associado a abortamentos em vacas de leite do estado de Santa Catarina, sul do Brasil pelo uso das técnicas de ELISA (HerdCheck, IDEXX), reação em cadeia pela polimerase (PCR) e imunohistoquímica (IHC). O sangue das vacas leiteiras que abortaram, bem como, o líquido intratorácico e amostras de tecidos (cérebro, coração, fígado e pulmão) de seus fetos foram coletados e usados para sorologia, PCR (Np21+ e Np6+), e IHC. Vinte e uma vacas (51,2%) de um total de 41, bem como, oito fetos (26,7%) de um total de 30 foram positivos no ELISA (IDEXX) para N. caninum. As vacas > 36 meses de idade tiveram um maior risco de serem soropositivas do que os animais mais jovens. PCR e IHC revelaram que 38,8% e 25,0% dos fetos foram positivos para N. caninum, respectivamente para cada um dos testes. As vacas soropositivas tiveram uma maior frequência de fetos que também foram positivos no fluído intratorácico, na PCR ou na IHC. Em resumo, o presente estudo observou uma alta frequência de N. caninum em abortos de vacas leiteiras na região estudada, com maior prevalência de N. caninum em vacas com mais de 36 meses de idade. Além disso, sorologia, PCR e IHC deveriam ser utilizadas conjuntamente para melhor diagnóstico de neosporose em bovinos.

Abstract The aim of the present study was to investigate the occurrence of N. caninum associated with abortions of dairy cattle from Santa Catarina state, southern Brazil by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunohistochemistry (IHC), and polymerase chain reaction (PCR). Blood from dairy cows that aborted along with intrathoracic fluid and tissue samples (brain, heart, liver, and lung) from their fetuses were collected and used for serology; PCR, histopathological, and immunohistochemistry (IHC) evaluations were also conducted. Twenty-one cows (51.2%) out of 41, and eight fetuses (26.7%) out of 30 were ELISA (HerdCheck, IDEXX) positive for N. caninum. Dams > 36 months of age had a higher risk of being serum positive than younger animals. PCR and IHC revealed that 38.8% (14/36) and 25.0% (9/36) of the fetuses were positive for N. caninum, respectively for each of the tests. Seropositive cows had a higher frequency of fetuses that were also positive by either intrathoracic fluid, PCR, or IHC. In summary, the present study observed a high frequency of N. caninum in abortions from dairy cows from southern Brazil, with a higher N. caninum prevalence found in cows that were older than 36 months. In addition, serology, PCR, and IHC should be used all together for better diagnosis of neosporosis in cattle.

Resumo O objetivo do presente estudo foi avaliar a eliminação de oocistos de Toxoplasma gondii em gatos imunizados pela via nasal com proteínas ROP2 de T. gondii. Doze gatos sem raça definida (Felis catus) foram divididos em três grupos experimentais G1, G2 e G3 (n = 4). Os animais do G1 receberam 100 μg de proteínas de rROP2 mais 20 μg de Quil-A, G2 recebeu 100 μg de albumina de soro bovino (BSA) junto com 20 μg de Quil-A, e o G3 recebeu apenas solução salina (grupo de controle). Todos os tratamentos foram realizados pela via intranasal nos dias 0, 21, 42 e 63. O desafio foi realizado em todos os grupos no dia 70 com aproximadamente 800 cistos de tecido da cepa ME-49 por via oral. Os animais de todos os grupos tiveram as suas fezes examinadas e o número de oocistos foi determinado durante 20 dias após o desafio. Os animais de G1 eliminaram menos oocistos (86,7%) do que os grupos controles. O ELISA foi utilizado para detectar IgG e IgA anti-rROP2, no entanto, não houve correlação entre o número de eliminhação de oocistos com os níveis de anticorpos IgG ou IgA. No presente trabalho, apesar da menor produção de oocistos no grupo imunizado (G1) em relação aos grupos controles (G2 e G3), não foi possível associar o uso de rROP2 pela via nasal com proteção contra eliminação de oocistos de T. gondii. Para o futuro, a utilização de outras proteínas recombinantes, ou mesmo vacina de DNA, em combinação com rROP2 poderia ser utilizada para tentar melhorar a eficácia deste tipo de vacina.

Abstract The aim of the present study was to evaluate oocyst shedding in cats immunized by nasal route with T. gondii proteins ROP2. Twelve short hair cats (Felis catus) were divided in three groups G1, G2 and G3 (n=4). Animals from G1 received 100 μg of rROP2 proteins plus 20 μg of Quil-A, G2 received 100 μg of BSA plus 20 μg of Quil-A, and the G3 only saline solution (control group). All treatments were done by intranasal route at days 0, 21, 42, and 63. The challenge was performed in all groups on day 70 with ≅ 800 tissue cysts of ME-49 strain by oral route. Animals from G1 shed less oocysts (86.7%) than control groups. ELISA was used to detect anti-rROP2 IgG and IgA, however, there were no correlation between number of oocyst shedding by either IgG or IgA antibody levels. In the present work, in spite of lesser oocysts production in immunized group than control groups, it was not possible to associate the use of rROP2 via nostrils with protection against oocyst shedding. For the future, the use of either other recombinant proteins or DNA vaccine, in combination with rROP2 could be tested to try improving the efficacy of this kind of vaccine.

Pombos silvestres (Zenaida auriculata), comuns em áreas urbanas, rurais e selvagens em muitas regiões do Brasil, são frequentemente predados por gatos domésticos. Sendo assim, os isolados de T. gondii obtidos de pombos podem refletir uma maior diversidade ambiental do que os outros hospedeiros. O objetivo do presente estudo foi avaliar a soroprevalência, isolar e genotipar T. gondii de Z. auriculata. Amostras de soro e tecido foram coletadas de 206 pombos para o teste de aglutinação modificado (MAT) e o bioensaio em camundongos. A prevalência de anticorpos contra T. gondii em pombos foi 22,3% (46/206), com títulos variando de 16 a 4096, e T. gondii foi isolado de 12 pombos. Cinco genótipos foram detectados por PCR-RFLP, incluindo os genótipos ToxoDB #1, #6, #17, #65 e um genótipo não descrito anteriormente (ToxoDB#182). Esse é o primeiro relato de isolamento de T. gondii de Z. auriculata. Este estudo também confirmou a diversidade dos isolados de T. gondii e a presença de tipo clonal II (ToxoDB #1) no Brasil.

Eared doves (Zenaida auriculata), which are common in urban, rural and wild areas in many regions of Brazil, are frequently prey for domestic cats. Therefore Toxoplasma gondii isolates obtained from doves may reflect greater environmental diversity than those from other hosts. The aim of the present study was to evaluate T. gondii seroprevalence, isolate and genotype strains from Z. auriculata. Serum and tissue samples were collected from 206 doves for use in the modified agglutination test (MAT) and mouse bioassay. The prevalence of T. gondii antibodies in the doves was 22.3% (46/206), with titers ranging from 16 to 4096, and T. gondii strains were isolated from 12 of these doves. Five genotypes were detected by means of PCR-RFLP, including ToxoDB genotypes #1, #6, #17 and #65, and one genotype that had not previously been described (ToxoDB#182). This was the first report on isolation of T. gondii from Z. auriculata. This study confirmed the genetic diversity of T. gondii isolates and the existence of clonal type II (ToxoDB genotype #1) in Brazil.

Este estudo avaliou a ocorrência de Eurytremaspp. em bovinos por meio da análise da sequência parcial do gene 18S rRNA. Trematódeos procedentes de 44 pâncreas bovinos foram coletados e classificados com base em aspectos morfológicos típicos. A técnica de PCR e a análise da sequência de nucleotídeos dos produtos amplificados confirmaram que os trematódeos classificados como Eurytrema coelomaticum eram filogeneticamente distintos daqueles identificados como E. pancreaticum. Os resultados deste estudo representam a primeira caracterização molecular de E. coelomaticum nas Américas e disponibiliza um método eficiente para diferenciar trematódeos digenéticos em animais domésticos.

This study investigated the occurrence of Eurytremaspp. in cattle by analysis of the partial 18S rRNA gene sequence. Trematodes from 44 bovine pancreas were collected and classified based on typical morphological features. PCR assay and sequence analyses of amplified products confirmed that the trematodes classified as Eurytrema coelomaticum were phylogenetically distinct from those identified as E. pancreaticum. The results of this study represent the first molecular characterization of E. coelomaticum within the Americas, and provide an efficient method to differentiate digenean trematodes of domestic animals.

O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de helmintos gastrintestinais e renais de Zenaida auriculata naturalmente infectados capturados em Londrina, Paraná. Duzentos e um pombos-de-bando foram capturados e os helmintos gastrintestinais e renais foram coletados e identificados de acordo com as estruturas morfológicas. Cento e dezesseis (57,71%) pombos estavam parasitados por helmintos com as seguintes prevalências:Ornithostrongylus quadriradiatus em 50 pombos (24,88%), seguido por Ascaridia columbae em 47 (23,38%),Paratanaisia bragai e P. confusa em 34 (16,92%), Tetrameres fissispina em 17 (8,46%),Synhimantus nasuta em 14 (6,47%), Brachylaima mazzantii em 4 (1,99%) e Raillietina allomyodes em 2 pombos (1,00%). Setenta e quatro/201 (37,00%) aves apresentaram-se infectadas por apenas uma espécie, e 96/201 (48,00%) pombos com nematodas. A associação entre diferentes classes de helmintos ocorreu em 40/201 (20,00%) animais. Os resultados mostraram diferenças estatísticas entre a presença de nematodas (p = 0,00001) e trematodas (p ≤ 0,05) em pombos, e houve associação entre o local de captura e a presença de trematodas e A. columbae (p ≤ 0,05). Este trabalho é o primeiro a relatar a infecção de Z. auriculata no Brasil com O. quadriradiatus,A. columbae, T. fissispina, S. nasuta, R. allomyodes, P. bragaie P. confusa.

This study aimed to determine the prevalence of gastrointestinal and renal helminths from naturally infected Zenaida auriculatacaptured in Londrina, Paraná State. Two hundred and one Eared doves were trapped and the gastrointestinal and renal helminths were collected and identified according to morphological structures. One hundred and sixteen (57.71%) doves were parasitized by helminths with specific prevalences forOrnithostrongylus quadriradiatus in 50 doves (24.88%),Ascaridia columbae in 47 (23.38%), Paratanaisia bragai and P. confusa in 34 (16.92%),Tetrameres fissispina in 17 (8.46%), Synhimantus nasuta in 14 (6.47%), Brachylaima mazzantii in 4 (1.99%) and Raillietina allomyodes in 2 doves (1.00%). Seventy four/201 (37.00%) birds were infected with only one species, and 96/201 (48.00%) pigeons were infected with nematodes. The association between different classes of helminths occurred in 40/201 (20.00%) animals. The results showed statistically differences between the presence of nematode (p = 0.00001) and trematode species (p ≤ 0.05) in the doves, and there was an association between the local of capture and the presence of trematodes and A. columbae (p ≤ 0.05). This study is the first to report the infection of Z. auriculata from Brazil with O. quadriradiatus, A. columbae, T. fissispina, S. nasuta, R. allomyodes, P. bragai and P. confusa.

Neospora caninum é um parasita de distribuição mundial reconhecido como um dentre os principais parasitas, responsável por abortamento em bovinos. O objetivo deste estudo foi avaliar a transmissão vertical de N. caninum em vacas leiteiras (Bos taurus) que foram submetidas ao abate em matadouro no Estado de Santa Catarina, sul do Brasil. Sangue (com e sem EDTA) de 60 vacas leiteiras prenhas e amostras de sangue e tecidos (cérebro, pulmão, coração e fígado) de seus fetos foram coletados e utilizados para PCR e avaliação sorológica. Amostras de sangue de 60 vacas não-gestantes foram obtidas e utilizadas para detecção de anticorpos. A detecção de anticorpos séricos anti-N. caninum foi avaliada pelo ELISA-teste indireto. Anticorpos anti-N. caninum foram observados em 41,6% (25∕60) das vacas prenhas e em 43,3% (26∕60) das vacas não-gestantes. Três fetos (5,5%) foram soros positivos para N. caninum. Análise pela PCR revelou que 3,3% (2∕60) das vacas e 6,6% (4∕60) dos fetos avaliados foram positivos paraN. caninum. As idades dos fetos positivos eram de 4 a 6 meses. Portanto, considerando a PCR e a sorologia como indicativo de transmissão vertical em fetos, 11,6% (7∕60) dos fetos foram infectados por N. caninum durante a gestação.

Neospora caninum is a worldwide parasite recognized as one of the main parasites responsible for abortion in cattle. The objective of this study was to evaluate vertical transmission of N. caninum in dairy cows (Bos taurus) that were slaughtered at an abattoir in the state of Santa Catarina, southern Brazil. Blood samples (with and without EDTA) from 60 pregnant dairy cows and blood and tissue samples (brain, lung, heart and liver) from their fetuses were collected and used for PCR and serological evaluation. Blood samples from 60 non-pregnant cows were collected and used to detect antibodies. Anti-N. caninum antibodies were detected by indirect ELISA. Antibodies against N. caninum were observed in 41.6% (25∕60) of the pregnant cows and in 43.3% (26∕60) of the non-pregnant cows. Antibodies against the parasite were detected in sera from three fetuses (5.5%). PCR analysis revealed that 3.3% (2∕60) of the cows and 6.6% (4∕60) of the fetuses evaluated were positive for specific N. caninum primers. These positive fetuses were between 4-6 months of age. Therefore, considering PCR and serological tests to be indicative of vertical transmission in fetuses, 11.6% (7∕60) of the fetuses were infected by N. caninum during gestation.

Erliquiose monocítica canina, causada principalmente por Ehrlichia canis, e anaplasmose trombocítica canina, devida a infecção com Anaplasma platys, são importantes doenças transmitidas por carrapatos que acometem os cães, com evidências que podem também acometer o homem. O presente estudo avaliou a ocorrência desses agentes em amostras de sangue de 256 cães domiciliados na cidade de Jataizinho, na região Norte do Paraná, Brasil, utilizando a técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). A ocorrência de E. canis e A. platys foi de 16,4% (42/256) e 19,4% (49/256), respectivamente, com 5,47% (14/256) dos animais apresentando coinfecção. Não foi observada associação significativa com as variáveis sexo, idade, acesso à rua e presença de carrapatos no momento da coleta de sangue. A infecção por E. canis teve relação com anemia e com trombocitopenia, enquanto a infecção por A. platys apresentou relação apenas com trombocitopenia. Com base nos resultados obtidos, reforçou-se a necessidade de que erliquiose e anaplasmose canina devem estar entre os diagnósticos diferenciais, quando da detecção de anemia e trombocitopenia em exames laboratoriais.

Canine monocytic ehrlichiosis caused primarily by Ehrlichia canis and canine thrombocytic anaplasmosis induced by Anaplasma platys are important emerging zoonotic tick-borne diseases of dogs. There is evidence that these pathogens can also affect humans. This study evaluated the presence of E. canis and A. platys in blood samples collected from 256 domiciled dogs in the municipality of Jataizinho, located in north region of the State of Parana, Brazil, by PCR assay. The occurrence of E. canis and A. platys was 16.4% (42/256) and 19.4% (49/256), respectively; while 5.47% (14/256) of the dogs evaluated were co-infected by these two organisms. The presence of E. canis and A. platys was not significantly associated with the variables evaluated (sex, age, outdoor access, and presence of ticks during blood collection). Infection of dogs by E. canis was associated with anemia and thrombocytopenia, while infection induced by A. platys was related only to thrombocytopenia. Canine monocytic ehrlichiosis and canine thrombocytic anaplasmosis should be included in the differential diagnoses when these hematological alterations are observed during routine laboratory evaluation of dogs.

Toxoplasma gondii é um parasito reconhecido mundialmente como o agente de uma das principais zoonoses em seres humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos contra T. gondii em vacas leiteiras abatidas em um matadouro para consumo humano. Amostras de soro de 120 vacas (60 prenhas e 60 não prenhas) foram coletadas e examinados pelo teste de imunofluorescência indireta (IFI). Os animais foram considerados positivos com títulos 50. Anticorpos contra T. gondii foram observados em 29.1% (35/120) dos animais, dos quais 29 (48,3%) e 6 (10,0%) eram, respectivamente, gestantes e não gestantes. As vacas gestantes apresentaram um risco 8.4 maior de soropositividade que os animais vazios (OR=8,4; 2,91<OR<25,6; P<0,0001). A comparação entre as raças também mostrou diferença significativa na ocorrência de anticorpos, sendo 38.3% (23/60) nas vacas Jersey e 20% (12/60) nas vacas Holandesa (OR=2.49, 1.02<OR<6.13, P=0.04). O principal título observado foi de 50 (n=23), seguido por 100 (n=10), 200 (n=1) e 400 (n=1). Nas 60 vacas gestantes não houve diferença na ocorrência de anticorpos com relação à idade gestacional (P=0,74). O potencial da carne bovina na epidemiologia do T. gondii para os seres humanos ainda é enigmático, e mais estudos são necessários para elucidar o real risco deste alimento para os consumidores.

Toxoplasma gondii is a worldwide parasite recognized as one of the main zoonosis in human beings. The present study aimed to evaluate serology of T. gondii from dairy cows slaughtered in an abattoir for human consume. Serum samples from 120 dairy cows (60 pregnant and 60 non-pregnant) were collected, and indirect fluorescent antibody test (IFAT) was performed to detect anti-T. gondii antibodies by considering positive animals with titers ≥50. Serologic results from cows showed 29.1% (35/120), which 29 (48.3%) e 6 (10,0%) were from pregnant and non-pregnant cows, respectively. This revealed a risk 8.4 times-higher of positively in pregnant than non-pregnant cows (OR=8.4, 2.91<OR<25.6, P<0.0001). There was a statistical difference in the anti-T. gondii antibody frequency between Jersey and Holstein breed cows, 38.3% (23/60) and 20% (12/60) of prevalence, respectively (OR=2.49, 1.02<OR<6.13, P=0.04). Titers for cows were 50 (n=23), 100 (n=10), 200 (n=1) and 400 (n=1). There was no difference among age of gestation and anti-T. gondii antibody occurrence (P=0.74) in pregnant cows. The potential role of beef in epidemiology of T. gondii for human beings is yet enigmatic, and more studies are necessary to elucidate the real risk of this food for consumers.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos, isolar e genotipar Toxoplasma gondii de vacas prenhas abatidas em um matadouro para consumo humano e de seus respectivos fetos. Sangue de 60 vacas gestantes e amostras de sangue e tecidos (cérebro, pulmão, coração e fígado) de seus fetos foram coletados e utilizados para bioensaio em camundongos. Anticorpos contra T. gondii foram observados em 48,3% das vacas e em 3,7% dos fetos (foram considerados positivos títulos ≥50 para as vacas e ≥25 para os fetos). Quatorze fetos (23,3%) e seis vacas (10,0%) apresentaram-se positivas para T. gondii ao bioensaio. T. gondii foi isolado de amostra de sangue de uma vaca com mais de quatro anos no 6º mês de gestação e de amostra de sangue de um feto no 6º mês de gestação. Por PCR esses isolados foram identificados como sendo de T. gondii e ambas as cepas apresentaram o alelo tipo II em todos os marcadores de PCR-RFLP testados. Esta é a primeira identificação de genótipo tipo II de T. gondii em bovinos do Brasil. Além disso, este estudo mostrou que a transmissão transplacentária de T. gondii ocorre naturalmente em bovinos de leite (23,3%).

The current study aimed to evaluate serology, and isolate and genotype Toxoplasma gondii strains from pregnant dairy cows, slaughtered in an abattoir for human consumption, and their fetuses. Blood from 60 pregnant dairy cows and blood and tissue samples (brain, lung, heart, and liver) from their fetuses were collected and analyzed in a mouse bioassay. Antibodies against T. gondii were observed in 48.3% of cows and 3.7% of fetuses (IFAT, titers ≥ 50 for cows and 25 for fetuses were considered positive). Fourteen fetuses (23.3%) and six cows (10.0%) were identified as positive in the bioassay. T. gondii was isolated from a blood sample of a cow older than 4 years old in the 6th month of pregnancy, and from a blood sample of a fetus in the 6th month of gestation. These isolates were identified by polymerase chain reaction (PCR) as being of T. gondii and both strains showed type II alleles for all PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) markers tested. T. gondii type II strain from cattle was isolated for the first time in Brazil. The current study also showed that transplacental transmission of T. gondii naturally occurs in dairy cows (23.3%) from Southern Brazil.

TgROP2 é uma proteína localizada nas roptrias do Toxoplasma gondii, sendo um antígeno candidato a componente de uma vacina contra a toxoplasmose. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da TgROP2 recombinante em estimular a resposta imune celular e humoral de camundongos BALB/c após estímulo intranasal. A sequência da TgROP2 foi amplificada pela PCR a partir da cepa RH e clonada em vetor de expressão pTrc-His. Após a transformação em Escherichia coli- Rosetta 2, a pTrcHis-TgROP2 exibiu alto nível de expressão após 4 horas de indução com IPTG. A proteína recombinante apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 54 kDa. Para avaliar a imunogenicidade dessa proteína recombinante, 10 camundongos receberam, pela via intranasal, 10 µg da rROP2 associado a 10 µg de Quil-A. Três doses foram realizadas nos dias 0, 21 e 42. No dia 62 do experimento, três animais foram eutanasiados para avaliar as respostas imune celular e humoral. Cinco (50%) e dois (20%) dos 10 animais apresentaram níveis de IgG (DO média = 0,307; ponto de corte = 0,240) e IgA (DO média = 0,133; ponto de corte = 0,101) acima do ponto de corte no ELISA no dia 62. A proliferação de esplenócitos revelou altos Índices de Estimulação (SI), quando as células foram cultivadas com 5, 10 e 15 µg.mL-1 de rTgROP2. Os resultados obtidos indicam que a via nasal pode estimular tanto a resposta imune celular como a humoral.

TgROP2 is an intracellular protein associated with rhoptries of Toxoplama gondii and an antigen component of a candidate vaccine for toxoplasmosis. The purpose of the present study was to evaluate the efficacy of rTgROP2 to stimulate humoral and cellular immune responses in BALB/c mice via intranasal injection. TgROP2 partial coding sequence was (196-561) amplified by PCR from genomic T. gondii RH strain DNA and cloned into the pTrcHis expression vector. Escherichia coli Rosetta 2 cells transformed with pTrcHis-TgROP2 showed high levels (~1 mg.mL-1) of recombinant protein after 4 hours of IPTG induction. Recombinant TgROP2 exhibited an apparent Mr equal to 54 kDa. In order to test immunogenicity of the recombinant protein, 10 BALB/c mice received 10 µg of rROP2 protein + 10 µg of Quil-A via intranasal injection. Doses were administered at days 0, 21, and 42. Three animals were euthanized and used to evaluate cell-ular immune response on day 62. Five (50%) and two (20%) out of ten animals produced IgG (DO mean = 0.307; cut-off = 0.240) and IgA (DO mean = 0.133, cut-off = 0.101), respectively, by ELISA on day 62. The proliferation of splenocytes revealed high stimulation index (SI) when co-cultured with 5, 10 and 15 µg.mL-1 of rTgROP2. These results indicate that intranasal immunization with recombinant protein ROP2 plus Quil-A can elicit both cellular and humoral immune responses in BALB/c mice.